AGL1 農桿菌電轉感受態(tài)細胞
簡要描述：
AGL1 農桿菌電轉感受態(tài)細胞：我司懋康生物提供的AGL1電轉感受態(tài)細胞經(jīng)特殊工藝制作，特別適合大質粒的轉化。基因型C58 RecA （rifR/carbR） Ti pTiBo542DT-DNA Succinamopine，經(jīng)pCAMBIA2301質粒檢測轉化效率>105 cfu/μg DNA。
產(chǎn)品時間：2024-03-26
打印當前頁AGL1 Electrocompetent cell 農桿菌電轉感受態(tài)細胞
產(chǎn)品標簽：
AGL1菌株；農桿菌感受態(tài)細胞；Rifampicin（Rif） 利fu平；Kanamycin（kan）卡那mei素； EHA101；LBA4404；GV3101；植物轉基因研究；
貨號 | 產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 價格（元） |
MF2310-0500UL | AGL1 Electrocompetent cell 農桿菌電轉感受態(tài)細胞 | 10×50μl | 600 |
MF2310-2500UL | AGL1 Electrocompetent cell 農桿菌電轉感受態(tài)細胞 | 50×50μl | 2400 |
【好消息】：見我司的感受態(tài)細胞*活動。買感受態(tài)細胞得京東卡，發(fā)表使用評論，贏紅包，雙重驚喜，行動起來啦。
產(chǎn)品描述：
AGL1菌株的染色體背景為C58，RecA，核基因含利fu平抗性基因rif和羧芐青mei素抗性基因carb，為了便于轉化操作，此菌株攜帶一無自身轉運功能的琥珀堿型Ti質粒pTiBo542DT-DNA，此質粒含有vir基因（vir基因是T-DNA插入植物基因組必需的元件，pTiBo542DT-DNA質粒自身的T-DNA轉移功能雖被破壞，但可以幫助轉入的雙元載體T-DNA順利轉移）。AGL1菌株適用于擬南芥、水稻、楊樹等植物的轉基因操作。
我司懋康生物提供的AGL1電轉感受態(tài)細胞經(jīng)特殊工藝制作，特別適合大質粒的轉化。基因型C58 RecA (rifR/carbR) Ti pTiBo542DT-DNA Succinamopine，經(jīng)pCAMBIA2301質粒檢測轉化效率>105 cfu/μg DNA。
產(chǎn)品組分：
組分編號 | 組分名稱 | 貨號（規(guī)格） | |
MF2310-0500UL | MF2310-2500UL | ||
MF2310-A | AGL1 Electrocompetent cell | 10×50μl | 50×50μl |
MF2310-B | pCAMBIA2301 對照載體 (10ng/μl) | 10μl | 10μl |
注意事項
1） 感受態(tài)細胞應保存在-80℃，不可反復凍融和放置時間過長，以免降低感受態(tài)細胞的轉化效率。
2） 整個轉化操作，嚴格根據(jù)相應溫度及無菌條件要求進行。
3） 加入質粒的體積不應大于感受態(tài)體積的1/10。質粒不純或存在乙醇等有機物污染，會導致轉化效率急劇下降。質粒增大一倍，轉化效率下降一個數(shù)量級。
4） 為確保zui高轉化效率，整個操作過程應盡量輕柔，并保持低溫。
5） 轉化高濃度的質粒可相應減少zui終涂板用量。
6） 平板上克隆密度過大時，由于營養(yǎng)不足，克隆生長變慢，菌落變小。為獲得大菌落，應減少質粒用量。
7） 利fu平濃度應≤25μg/ml，過高濃度不利于農桿菌生長，會降低其生長速度和轉化效率。我司EHA101感受態(tài)計算轉化效率時所用平板只含50μg/ml卡那mei素，若所用平板含20μg/ml 利fu平，則轉化效率降低到1/2。
8） 培養(yǎng)基中加入利fu平的目的是防止雜菌生長、篩選農桿菌；根據(jù)所用菌株抗性加入Ti質粒篩選抗生素可防止Ti質粒丟失，但這些篩選抗生素不利于農桿菌的轉基因操作，所以一般培養(yǎng)農桿菌時不考慮這些篩選抗生素，因Ti質粒丟失的概率極低（基本可以忽略）。
9） 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
使用方法
1) 將0.1 cm店擊杯和杯蓋從儲存液中拿出倒置于干凈吸水紙上5min，待其瀝干水分，正置5min，使乙醇充分揮發(fā)干凈，立即插入冰中，壓實冰面，電極杯頂離冰面0.5cm以方便蓋上杯蓋，冰中靜置5min使其充分降溫。
2) 取-80℃保存的感受態(tài)細胞于室溫或手心片刻待其部分融化，達到冰水混合狀態(tài)時插入冰浴中使其*融化。
3) 往50μl感受態(tài)細胞懸液中加入0.01~1μg（體積不大于6μl）質粒DNA，用手管底使其混勻，立即插入冰中。用槍輕輕吹打混勻感受態(tài)細胞-質粒之后快速轉移到店擊杯中，蓋上杯蓋，空管保留待用【注意：由于感受態(tài)轉化效率較高，*次使用做預試驗確定zui加的質粒用量】。
4) 啟動電轉儀，設置參數(shù)：C=25 μF，PC=200 ohm，V=2400 V（此參數(shù)參考Bio-rad，具體使用請參考電轉儀推薦步驟來操作），將店擊杯快速放入電轉槽中，店擊完成快速插入冰中。
5) 加入700 μl無抗生素的LB并轉移到感受態(tài)空管中，于28℃振蕩培養(yǎng)2~3h。
6) 6,000rpm離心1min，吸掉600ul上清，之后用槍輕輕吹打重懸菌體。之后加到含相應抗生素的LB或YEB平板上，用無菌玻棒輕輕的將細胞均勻涂開。室溫正置10 min，待液體被吸收后，倒置平板，28℃培養(yǎng)2-3天。【注意：當平板只含轉化所用雙元載體抗生素時，28℃培養(yǎng)48h即可；當平板中加入雙元載體抗生素的同時，再加入20μg/ml 利fu平時，需28℃培養(yǎng)60h；若使用的平板含50μg/ml 利fu平，需在28℃培養(yǎng)72-90h。】
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附表1 固體和液體LB培養(yǎng)基配方
組分Component | LB（液體）/升 | LB（固體）/升 |
胰蛋白胨 Tryptone | 10g | 10g |
酵母提取物 Yeast extract | 5g | 5g |
氯化鈉 NaCl | 10g | 10g |
1N NaOH | 調整pH至7.0 | 調整pH至7.0 |
瓊脂 Agar | / | 15g |
附表2 固體和液體YEB培養(yǎng)基配方
組分Component | YEB（液體）/升 | YEB（固體）/升 |
胰蛋白胨 Tryptone | 5g | 5g |
酵母提取物 Yeast extract | 1g | 1g |
牛肉浸膏 Beef Extract | 5g | 5g |
蔗糖 Sucrose | 5g | 5g |
七水硫sun鎂 MgSO4·7H2O | 0.49g | 0.49g |
1N NaOH | 調整pH至7.0 | 調整pH至7.0 |
瓊脂 Agar | / | 15g |
附表3常見農桿菌對抗生素敏感性總表
農桿菌菌株 | 羧芐（carb） | 鏈mei素（strep） | 利fu平（rif） | 慶大mei素（gent） | 卡那mei素（kan） |
EHA101 | S | S | R | S | R |
EHA105 | S | S | R | S | S |
LBA4404 | S | R | R | S | S |
GV3101 | S | S | R | R | S |
AGL1 | R | S | R | S | S |
【備注】：S代表敏感，R代表抗性。 | |||||
— —Written/Edited by V. Shallan【版權歸MKBio懋康所有】
上海懋康生物科技有限公司是一家涉足于生命科學和生物技術領域研究的試劑、儀器和實驗室消耗品與實驗服務工作，主要從事細胞生物學、植物學、分子生物學、免疫學、生物化學、蛋白組學。生物制藥與診斷試劑研發(fā)生產(chǎn)等領域。 本公司秉承“以人為本，以誠為信、合同守信"的經(jīng)營理念。堅持"品質保障"的原則為廣大客戶提供優(yōu)質產(chǎn)品。
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