F-DH5a Chemically Competent Cell 大腸桿菌化學感受態細胞

產品標簽：

F-DH5a；F-*0；DH10B；JM109；EPI400；羧芐；卡那mei素；鏈mei素；

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產品組分：

菌株描述

DH5a菌株基因型：F-φ80 lac ZΔM15 Δ(lacZYA-arg F) U169 endA1 recA1 hsdR17(rk-,mk+) supE44λ- thi-1 gyrA96 relA1 phoA

產品描述

本品是大腸桿菌DH5a菌株經特殊工藝制作所得的快速轉化感受態細胞，無需42℃熱激，37℃孵育步驟，只需冰浴，10min內能完成轉化、涂板步驟。經pUC19質粒檢測轉化效率可達1~5×108 cfu/μg DNA。且在-80℃能穩定保存幾個月轉化效率不發生改變。

注意事項

5）   產品包裝內含質粒pUC19 DNA(10pg/μl)，供對照實驗用。

6）   為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

使用方法【所有操作均在無菌條件的標準下進行】

一、  快速轉化操作（10min）

1.1    提前15min將用到的篩選培養平板拿到37℃預熱。

1.2    取F-DH5a感受態細胞從-80℃取出，迅速插入冰中，5min后待菌塊融化，加入目的DNA（質粒或連接產物），并用手彈打管底輕輕混勻，冰中靜置5min。

1.3    用移液槍將感受態細胞-DNA混合物轉移到37℃預熱的LB篩選培養平板上，用無菌的涂布棒將細胞均勻涂開，表面無水漬。

1.4    將平板倒置于37℃過夜培養。如果進行藍白斑篩選，至少培養15h。

【注意】：F-DH5a感受態細胞涂含氨芐或羧芐篩選培養平板時效率搞，若涂卡那mei素或其他抗生素平板，轉化效率會下降（由于沒有孵育步驟，卡那mei素等對菌體毒性較大）。若要提高卡那mei素或其他抗性質粒的轉化效率，按照快速熱激轉化操作。

二、  快速熱激轉化操作（25min，能提高轉化效率）

【注意】：當質粒＞7kb，通過以下熱激轉化操作：取F-DH5a感受態細胞從-80℃取出，迅速插入冰中，5min后待菌塊融化，加入目的DNA（質粒或連接產物），并用手管底輕輕混勻，冰中靜置20min。

42℃水浴熱激45s，迅速放回冰上并靜置2min。加入700μl 無菌的LB培養基（不含抗生素），混勻后置于37℃ 搖床，200 rpm振蕩培養30min。之后涂板。

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— —Written/Edited by V. Shallan【版權歸MKBio懋康所有】

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F-DH5a化學感受態細胞

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